土壤硝酸還原酶(S-NR)試劑盒操作原來這么方便！

硝酸還原酶是一種氧化還原酶，可催化硝酸離子還原成亞硝酸離子的反應(yīng)。
硝酸還原酶位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)或細(xì)胞膜外，在硝酸鹽還原途徑中是限速因子，通過 NADH和 NADPH 其中之一或兩者( 雙功能) 提供兩個(gè)電子催化反應(yīng)，使硝酸鹽轉(zhuǎn)換成亞硝酸鹽。

硝酸還原酶是同源二聚體，每個(gè)亞基分子質(zhì)量約100～110kDa，包含三個(gè)功能區(qū)，從N-末端到C-末端分別是:鉬輔酶MoCo(硝酸鹽結(jié)合與降解區(qū)域)，血紅素-Fe(細(xì)胞色素b5結(jié)合域)和FAD(黃素腺苷酸二核苷酸磷酸、細(xì)胞色素b還原酶、NADH或NADPH結(jié)合域)。這三個(gè)區(qū)域是氧化還原中心，催化電子從NADP或NADPH轉(zhuǎn)移到硝酸鹽上。這三個(gè)結(jié)構(gòu)和功能域通過hingeⅠ和hingeⅡ兩個(gè)鉸鏈連接起來。

植物體內(nèi)，hingeⅠ連接細(xì)胞色素b5結(jié)合域和鉬輔酶/二聚化區(qū)域，它包含一個(gè)保守的磷酸化絲氨酸殘基，被具有調(diào)控作用的14-3-3二聚體識別，在植物、真菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞中這個(gè)二聚體來自一個(gè)高度保守的基因家族。在二價(jià)陽離子存在的情況下，hingeⅠ把硝酸還原酶轉(zhuǎn)換成*無活性的復(fù)合體，使之不能行使從NADPH到硝酸鹽之間的電子轉(zhuǎn)移，從而抑制酶的活性。

產(chǎn)品說明：

S-NR 催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，是土壤硝態(tài)氮還原的關(guān)鍵酶。研究S-NR 的活性對合理施肥，降低氮素的損失具有重要意義。
S-NR 催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，NO3ˉ +NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋+H2O；產(chǎn)生的亞硝酸鹽
能夠在酸性條件下，與對–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成紅色偶氮化合物；未反應(yīng)的NADH會抑
制后續(xù)的顯色反應(yīng)，用PMS將其中和后再進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)；生成的紅色偶氮化合物在 520 nm 有大
吸收峰，可用分光光度法測定。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量比色皿/96孔板、冰和蒸餾水。

活性計(jì)算：

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：
以 0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液為橫坐標(biāo)，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到
線性回歸方程 y=kx+b，將ΔA 測定代入方程得到 x（μmol/mL）；

2、S-NR 活性計(jì)算
單位的定義：24h 每 g 土樣中產(chǎn)生 1μmol NO2ˉ的量為一個(gè) S-NR 活力單位。
S-NR（U/g）=x×V 標(biāo)準(zhǔn)÷W÷T
=24×x
V 標(biāo)準(zhǔn)：反應(yīng)體系中加入的標(biāo)準(zhǔn)液體積，0.1mL；W：樣本鮮重，0.1g；T：反應(yīng)時(shí)間，1/24h。

注意事項(xiàng)：

1、試劑一、試劑二和試劑四在冰上放置，用完立即放回-20℃。

2、每個(gè)測定管設(shè)一個(gè)對照管。

3、ΔA 測定過小（小于 0.01），可延長反應(yīng)時(shí)間（37℃水浴時(shí)間）。